-
Telefon
+86-0755 2308 4243
-
Adresa
Pokoj 309, Meihua Building, Taiwan Industrial Park, No.2132 Songbai Road, Bao'an District, Shenzhen, Čína
-
E-mail
FAQ
Jaké metodologie syntézy používá Biorunstar pro syntézu peptidů?
RE: Biorunstar vyvinul různé metodologie syntézy ve fázi řešení, aby splnily požadavky zákazníků. Obvykle se používá chemie Fmoc na pevné fázi.
Jak posíláte peptidy? Jaká data kontroly kvality budou poskytnuta?
RE: Všechny peptidy budou zasílány společností DHL nebo FedEx express jako v lyofilizovaném prášku v jednotlivých dobře označených lahvičkách při pokojové teplotě. S výjimkou surových peptidů, které budou kontrolovány pouze spektrometrií MALDI-MASS, jsou všechny syntetické purifikované peptidy dodávány se zprávou o projektu (CoA), MS data a HPLC data. budou poskytnuty datové listy, které obsahují klíčové charakteristiky, jako je peptidová sekvence, čistota, množství, modifikace, údaje o hmotnostním spektru a údaje z HPLC.
Jaká je typická doba obratu pro syntézu peptidů? Jak dlouho trvá odeslání ke mně?
RE: Naše typická doba obratu je 2-3 týdnů pro standardní peptid s méně než 30 aminokyselinami. Doba obratu se liší v závislosti na délce peptidu, množství, rozpustnosti a obtížnosti. Obvykle 3-5 dní na oslovení výzkumníků v jiných zemích.
Jak dlouho dokážete syntetizovat?
RE: Biorunstar má rozsáhlé zkušenosti se syntézou dlouhých peptidů, až 130aa. Na rozdíl od mnoha dodavatelů peptidů, kterým vyhovuje pouze výroba peptidů pod 30 nebo 40 aa, má Biorunstar dobré zkušenosti s výrobou peptidů v rozmezí od 40aa do 90aa. Je obtížné syntetizovat dlouhé peptidy, zejména 100aa nebo delší. Pokud plánujete syntetizovat sekvenci 130aa nebo delší, kontaktujte nás pro vlastní expresi a purifikaci proteinů.
Co když se během procesu syntézy nebo čištění objeví nějaké problémy?
RE: Každý peptid má své specifické vlastnosti. Pokud se během syntézy vyskytnou nějaké problémy nad naše očekávání a nebudeme moci dodat váš peptid včas, budeme vás co nejdříve informovat. Náhodou, že nejsme schopni peptid vyrobit, nebudou vám účtovány žádné náklady.
Forma soli TFA, forma soli acetátu nebo HCl: Jakou formu si mám vybrat?
Ve výchozím nastavení jsou peptidy syntetizovány v TFA soli. U experimentů souvisejících s buněčnými nebo tkáňovými kulturami byste měli zvážit produkci peptidů ve formě acetátu nebo HCl soli v koncentraci 98 % nebo vyšší, abyste se vyhnuli abnormálním reakcím. Forma acetátu nebo HCl soli může být požadována za příplatek.
Jaká je trvanlivost peptidu?
RE: Peptidy jsou stabilní minimálně jeden rok, pokud jsou skladovány lyofilizované v mrazáku. Pokud jsou peptidy rozpuštěny, může se zkrátit skladovatelnost. Pokud peptidy obsahují několik reaktivních aminokyselin, které mohou být oxidovány jako Trp, Met, ale zejména Cys, může být také snížena skladovatelnost.
Peptid obsahuje několik cysteinů a může proto snadno vytvářet disulfidové vazby. Jak se tomu mám vyhnout?
RE: Pokud peptidová sekvence obsahuje několik cysteinů nebo jiných reaktivních aminokyselin, které se snadno oxidují, Biorunstar nabízí dodání peptidu se stopami silného redukčního činidla DTT. Peptid je dodáván pouze s DTT, pokud je to výslovně povoleno zákazníkem.
Jak skladuji své syntetické peptidy?
RE: Většina lyofilizovaných peptidů bude stabilní při pokojové teplotě po dobu 2-3 týdnů. Pro dlouhodobé skladování byste měli lyofilizované peptidy skladovat při -20 stupních . Je třeba se vyhnout opakovaným cyklům zmrazování a rozmrazování. Před otevřením nechte ohřát na pokojovou teplotu. Skladovatelnost peptidových roztoků je omezená; připravený peptidový roztok by měl být použit co nejdříve.
Jaká je čistota surového peptidu a odsoleného peptidu? Jak čistíte peptid? Jaké jsou nečistoty?
RE: Pro krátké peptidy s normálními sekvencemi pod 15aa je to obecně 40-60 % podle HPLC pro surový stupeň; 50-70 % podle HPLC pro odsolený stupeň. Čím delší je peptid, tím nižší je čistota surového nebo odsoleného. Peptidy se obecně čistí pomocí HPLC za použití gradientu vody a acetonitrilu. Většina nečistot jsou fragmenty nebo deleční peptidy, peptidy s neúplnou deprotekcí a zbytková sůl a voda.
Vysvětlení čistoty peptidu pomocí HPLC, celkový obsah peptidu a obsah cílového peptidu.
RE: Biorunstar dodává peptidy podle hrubé hmotnosti lyofilizovaného prášku. Lyofilizovaný prášek obsahuje nečistoty, jako jsou fragmenty nebo deleční peptidy, peptidy s neúplnou deprotekcí, TFA a zbytková voda. Čistota peptidu se měří pomocí HPLC. Je to množství správného peptidu vzhledem ke všem analytům, které absorbují při ~214 nm (peptidová vazba absorbuje), s největší pravděpodobností delece, zkrácení nebo neúplně de-chráněné sekvence atd. Čistota peptidu pomocí HPLC nebere v úvahu vodu a soli které jsou obvykle přítomny ve vzorku. Celkový obsah peptidů je procento celkových peptidů přítomných v poměru ke všemu přítomnému v lyofilizovaném peptidovém prášku. Celkový obsah peptidu se stanoví analýzou obsahu dusíku. Cílový obsah peptidu v lyofilizovaném peptidovém prášku lze tedy uzavřít vzorcem: Celkový obsah peptidu X Čistota peptidu pomocí HPLC.
Jaká je metoda značení fluoresceinem?
RE: FITC (Fluorescein isothiokyanate) je aktivovaný prekurzor používaný pro značení fluoresceinu. Pro účinné značení N-konce sedmiatomový aminohexanoyl
spacer (NH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) je vložen mezi fluorofor (fluoroscein) a N-konec peptidu. Tento spacer pomáhá oddělit fluorofor od místa jeho připojení, čímž potenciálně snižuje interakci fluoroforu s biomolekulou, ke které je konjugován, a činí jej dostupnějším pro sekundární detekční činidla.
spacer (NH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) je vložen mezi fluorofor (fluoroscein) a N-konec peptidu. Tento spacer pomáhá oddělit fluorofor od místa jeho připojení, čímž potenciálně snižuje interakci fluoroforu s biomolekulou, ke které je konjugován, a činí jej dostupnějším pro sekundární detekční činidla.
Je možné C-terminální značení biotinu (nebo FITC)?
RE: Ano. C-koncové značení biotinu (nebo FITC) se provádí přidáním lysinového zbytku na C-konec peptidu a biotin (nebo FITC) je připojen k postrannímu řetězci lysinu prostřednictvím amidové vazby. Kladný náboj lysinu je odstraněn.
Jaká je vhodná délka peptidu pro produkci protilátek?
RE: Obecně se doporučuje 10-25 zbytek peptidu. Delší peptid by mohl mít více epitopů, ale mohl by mít také větší šanci na vytvoření stabilních sekundárních struktur, které nejsou nativními formami. Kratší peptid (<10aa) is generally not good unless there are valid reasons for it, such as potential sequence homology with a related family member or other proteins.
Co je MAP?
RE: MAPS nebo Multi-antigenní peptid je rozvětvený peptid, ve kterém jsou lineární peptidové řetězce spojeny na jejich C-konci přes polylysinové jádro, čímž se zvětšuje velikost celé molekuly. To se provádí za účelem eliminace vazby peptidů na KLH. Zdá se však, že konformace peptidů na MAP je méně flexibilní a protilátky získané pomocí MAP typicky rozpoznávají cílový protein méně často než konvenční konjugací KLH. Navíc při výrobě MAPS nevzniká žádný volný peptid, což ztěžuje odstranění protilátek zaměřených na jádro polylysinu. Purifikace MAPS pomocí HPLC je obtížná a MAPS je poskytován bez ověření hmotnosti kvůli své heterogenitě a velké molekulové velikosti.
Proč se můj KLH-konjugovaný peptidový roztok jeví zakalený?
RE: KLH neboli Keyhole Limpet Hemocyanin je velký agregační protein (MW=4x105 – 1x107). Vzhledem k jeho velikosti a struktuře je jeho rozpustnost ve vodě omezená, což způsobuje zakalený vzhled. To neovlivní imunogenicitu a zakalený roztok lze použít k imunizaci.
Můžete vysvětlit hmotnostní píky M+Na a M+K v MALDI spektrech?
RE: Ve spektru MALDI je velmi běžné vidět adukty Na (sodík) a K (draslík). Sodík a draslík pochází z vody používané v peptidových rozpouštědlech. Dokonce i destilovaná a deionizovaná voda obsahuje stopová množství sodných a draselných iontů, které nelze nikdy zcela odstranit. Ty se během MALDI hmotnostního procesu ionizují a vážou se na volné karboxylové skupiny peptidu. Protože neexistuje žádný systém čištění vody, který by z vody odstranil každý jednotlivý iont sodíku nebo draslíku, pozorování aduktů sodíku a draslíku je občas velmi běžné a nevyhnutelné v hmotnostní specifikaci MALDI. To neznamená, že peptid není čistý, ani by neměl být zaměňován s nesprávnou molekulovou hmotností.