Mezi běžné problémy a řešení v procesu syntézy peptidů patří následující aspekty:
Obsah peptidu: Obsah peptidu se týká procenta peptidových látek ve vzorku vzhledem k nepeptidovým látkám. V peptidových produktech jsou kromě samotného peptidu zahrnuty také nesolné složky zavedené během výrobního procesu, jako je voda, absorbovaná rozpouštědla, koordinační ionty a soli.
Chemická stabilita:
Deamidační reakce: Asn/Gln zbytky se snadno hydrolyzují za vzniku Asp/Glu.
Hydrolýza: Peptidové vazby v peptidech jsou snadno rozrušeny hydrolýzou, zejména ty, které jsou tvořeny účastí Asp, zejména peptidové vazby Asp Pro a Asp Gly.
Racemizační reakce: Všechny aminokyselinové zbytky kromě Gly mají chirální alfa atomy uhlíku a jsou náchylné k racemizační reakci za alkalické katalýzy. Asp zbytky jsou nejvíce náchylné k racemizačním reakcím.
- eliminační degradace: Cys, Ser, Thr, Phe, Tyr a další zbytky mohou být všechny degradovány prostřednictvím - eliminace, která se pravděpodobněji vyskytuje při alkalickém pH a je ovlivněna teplotou a kovovými ionty
Fyzická stabilita:
Denaturace, adsorpce, agregace nebo precipitace: Denaturace peptidů obvykle souvisí s destrukcí terciárních a sekundárních struktur. V denaturovaném stavu jsou peptidy náchylnější k chemickým reakcím a jejich aktivita se obtížně obnovuje. Meziprodukt vzniklý během denaturačního procesu má nízkou rozpustnost a je náchylný k agregaci a srážení
zachování:
Nejlepší podmínky skladování: Peptidy jsou obecně skladovány ve formě lyofilizovaného prášku, který je velmi stabilní při -20 stupních, zejména po lyofilizaci a skladován v -20 stupních sušičky. Většina peptidů může být při této teplotě skladována několik let beze změny. Aby se snížil vliv vlhkosti, měly by se lyofilizované peptidy před vystavením vzduchu vrátit na pokojovou teplotu za sucha.
Balení: Hesheng Biotechnology doporučuje malé balení, aby se zabránilo opakovaným cyklům zmrazování a rozmrazování, omezil se počet otevírání a uzavírání nádob, čímž se snížila pravděpodobnost nesprávné manipulace nebo bakteriální kontaminace a zajistila se stabilita peptidů.
Testování čistoty:
Záruka čistoty: Všechny dodané peptidy dosáhly požadované čistoty a peptidy, které nesplňují standard, budou vyřazeny. Výsledky detekce HPLC a MS mohou ověřit čistotu a molekulovou hmotnost peptidu a současně zobrazit hlavní nečistoty.
Jiné detekční metody, jako je analýza aminokyselin nebo elementární analýza, mohou potvrdit složení aminokyselin v peptidech jako doplňkový prostředek k potvrzení peptidu.
Technologie syntézy:
Syntéza peptidů na pevné fázi: Syntéza peptidů na pevné fázi nevyžaduje čištění meziproduktů, což umožňuje kontinuální procesy syntézy a pokládá základy pro automatizaci syntézy peptidů. Na základě chemické syntézy Fmoc byl cílový peptid syntetizován kovalentním spojením karboxylové skupiny C-koncové aminokyseliny s nerozpustnou polymerní pryskyřicí a poté vycházeje z aminoskupiny aminokyseliny
Výše uvedený obsah shrnuje běžné problémy a protiopatření při syntéze peptidů, pokrývající různé aspekty, jako je chemická stabilita, fyzikální stabilita, podmínky skladování, testování čistoty atd.