Biotinové peptidy

Co jsou biotinylované peptidy?

Biotinylované peptidy jsou peptidy, které byly modifikovány tak, aby zahrnovaly biotinovou skupinu. Tato modifikace využívá vysoko{1}}afinitní interakci mezi biotinem a avidinem nebo streptavidinem, která je široce používána v biologických a biochemických aplikacích. Molekula biotinu je malá, stabilní a významně nemění strukturu ani funkci peptidu, přičemž umožňuje vysoce účinné zachycení nebo detekci prostřednictvím systémů na bázi avidinu-.

 

Chemická modifikace
Biotin se typicky zavádí prostřednictvím NHS-biotinového (N-hydroxysukcinimid biotin) činidla, které reaguje s primárními aminovými skupinami nacházejícími se na N{2}}konci peptidu nebo lysinovými zbytky a vytváří stabilní amidovou vazbu.

生物素（Biotin） 肽（Peptid）

COOH NH2

| |

+---EDC/NHS---→ 活化羧基（Aktivace） → 缩合（Spojka）

↓ ↓

Biotin-CONH-peptid

 

Afinitní interakce
Biotinylovaný peptid se může silně vázat (Kd ~10⁻15M) na avidin nebo streptavidin, takže je ideální pro použití v testech, které vyžadují přesnou detekci, zachycení nebo imobilizaci.

Případy syntézy biotinylovaných peptidů

Peptidová sekvence: Biotin-Ahx-YXXXXXRXRRR-NH2

Délka: 11A

Purity: >95%

M.W: 1898.32

Peptidová sekvence: Biotin-YXXXXXRXRRR--ERXXXDLXXXXPVXXXXPRR

Délka: 31A

Purity: >95%

M.W: 4145.89

 

Aplikace biotinylovaných peptidů

Biotinylované peptidy jsou všestranné nástroje ve výzkumu a průmyslu se širokou škálou aplikací, včetně:

Afinitní čištění

Používá se k čištění vazebných partnerů, jako jsou proteiny, protilátky nebo nukleové kyseliny, imobilizací biotinylovaného peptidu na kuličkách streptavidinu.

ELISA a Western blotting

Biotinylované peptidy fungují jako sondy pro detekci specifických interakcí, když jsou spojeny s avidin{0}}HRP nebo avidin{1}}fluorescenčními značkami.

Povrchová plazmonová rezonance (SPR)

Používá se pro imobilizaci peptidů na biosenzorových čipech pro interakční studie.

Objev drog

Screening lékových kandidátů analýzou jejich vazby na biotinylované peptidové cíle.

Imunologie

Biotinylované peptidy se používají k mapování epitopů, studiu interakcí s antigeny{0}}protilátek a provádění testů na T-buňkách.

Mapování epitopů pro vývoj vakcín

Vlastní biotinylovaný peptid byl použit k identifikaci antigenních epitopů virového proteinu, což pomohlo navrhnout kandidáta na vakcínu.

Proteinové-studie interakce s proteiny

Biotinylované peptidy imobilizované na streptavidinem{0}}potažených destičkách umožnily studium interakcí receptorů-ligandů a odhalily vazebné afinity kritické pro vývoj léčiv.

Optimalizace imunoanalýzy

V diagnostickém testu byly biotinylované peptidy použity jako antigeny pro zlepšení citlivosti a specificity ELISA pro detekci biomarkerů onemocnění.

 

Reference

1. Green, NM (1975).Avidin a streptavidin.Biochemical Journal, 131(3), 781-791.

2. Chaiet, L., & Wolf, FJ (1964).Vlastnosti streptavidinu, biotin-vázajícího proteinu produkovaného Streptomyces.Archiv biochemie a biofyziky, 106(1), 1-5.

3. Finn, FM, & Titus, G. (1994).Biotinylace proteinů ve výzkumu a biotechnologii.Anal Biochem, 218(1), 1-7.