Hybridomové buněčné expanze a subklonovací médium 杂交瘤细胞扩培及亚克隆专用培养基

产品信息 Popis produktu

产品名称

Název produktu

杂交瘤细胞扩培及亚克隆专用培养基

Hybridomové buněčné expanze a subklonovací médium

货号 Kat.č

BRS-MED02

规格

Specifikace

500 ml/cca

500 ml/lahev

产品组分

Komponenty

DMEM基础培养基:80 % (体积比)

Základní médium DMEM: 80 % (v/v)

进口胎牛血清:10%(体积比)

Fetální bovinní sérum (FBS, import): 10 % (v/v)

条件培养基:10%(体积比)

Kondicionované médium: 10 % (v/v)

青霉素:100 单位/ml

Penicilin: 100 U/ml

链霉素:100 单位/ml

Streptomycin: 100 U/ml

其它添加物:单细胞增殖因子及小分子添加剂

Další aditiva: Jedno-buněčné proliferační faktory a doplňky s malými molekulami

保存条件

Podmínky skladování

-20 stupňů 保存, 有效期 18 个月.

Skladujte při -20 stupních, trvanlivost 18 měsíců

使用方法

Návod k použití

培养基融化:

37 stupňů 水浴融化本培养基,乙醇消毒外表面后置超净台备用;

注:本品融化后出现少量白色絮状物属正常现象,静置3-5min使其

沉至瓶底,然后吸取上清使用即可.

Rozmrazování média:

Rozmrazte médium ve vodní lázni o teplotě 37 stupňů. Otřete vnější povrch 70% etanolem a umístěte jej do biologické bezpečnostní skříně k použití.
Poznámka: Vzhled malého množství bílého vločkovitého materiálu po rozmrazení je normální. Nechte médium 3–5 minut odstát, aby se vločky usadily, a poté odeberte supernatant k použití.

融合孔处理(状态良好细胞):

针对状态良好的融合孔(比如孔内培养基颜色正常或轻微发黄,且显微镜下细胞状态良好,透亮,大小正常等)可直接使用黄枪头轻轻吹打融合孔,细胞计数后按0,8-1,5 buňky/孔/200ul培养基铺数合孔

Manipulace s Fusion Wells – zdravé buňky:

U fúzních jamek s buňkami v dobrém stavu (např. barva média normální nebo slabě žlutá, buňky pod mikroskopem vypadají zdravé, světlé a mají normální velikost), jemně pipetujte nahoru a dolů žlutou špičkou pipety. Spočítejte buňky a destičku v množství 0,8–1,5 buněk/jamku ve 200 µl média.

融合孔处理(状态欠佳细胞):

针对状态不太良好的融合孔(比如孔内培养基颜色酸化发黄或显微镜下细胞状态皱缩,发黑等)可选择2种方式进行后续亚克隆.

Manipulace s fúzními jamkami – suboptimální buňky:

Pro fúzní jamky s buňkami v suboptimálním stavu (např. středně okyselené/žluté nebo buňky vypadají pod mikroskopem scvrklé, tmavé) jsou k dispozici dvě možnosti pro následné subklonování:

第一种方式是将融合孔细胞吸至装有1ml本培养基的24孔板内,在扩培后的第2-3日再行计数进行亚克隆铺板(0. 8-1,5 buňky/孔/200ul培养基),此时融合孔细胞倍增的次数有限且细胞状态良好,非常适于亚克隆铺板;

Možnost 1: Přeneste buňky z fúzní jamky do 24jamkové destičky obsahující 1 ml tohoto média. Po 2–3 dnech expanze spočítejte buňky a proveďte subklonování v množství 0,8–1,5 buněk/jamku ve 200 µl média. V této fázi je zdvojení buněk omezené, ale stav buněk je dobrý, takže je ideální pro subklonování.

第2种方式是使用黄枪头小心吸弃融合孔上清,每孔补充200ul新鲜的本培养度5%% CO2静置培养3-4小时,然后取样细胞计数后进行亚克隆(0,8-1,5 buňky/孔/200ul培养基);

Opatrně odstraňte supernatant z fúzní jamky pomocí žluté špičky pipety a přidejte 200 µl čerstvého média na jamku. Inkubujte při 37 stupních, 5 % CO₂ po dobu 3–4 hodin. Poté odeberte vzorky buněk, spočítejte je a proveďte subklonování v množství 0,8–1,5 buněk/jamku ve 200 µl média.

注:使用本司"杂交瘤扩培及亚克隆专用培养基"培养后的亚克隆一般第6-8日即可开始下游检测筛选.

Poznámka: Subklony kultivované pomocí hybridoma Cell Expansion and Subcloning Medium obvykle dosáhnou stádia vhodného pro následný screening nebo analýzu ve dnech 6–8 po-subklonování.